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有谁会想到 ,一种红眼 、双翅、羽状触角芒、身体分节 、黄褐色的小昆虫,在近百年间竟然能够“培养”出好几位获得诺贝尔奖的大科学家。它就是果蝇。果蝇英文俗名fruitfly或vinegarfly,果蝇广泛地存在于全球温带及热带气候区 ,而且由于其主食为腐烂的水果,因此在人类的栖息地内如果园,菜市场等地区内皆可见其踪迹 。除了南北极外 ,至少有1000个以上的果蝇物种被发现,大部分的物种以腐烂的水果或植物体为食,少部分则只取用真菌 ,树液或花粉为其食物。
在不供给食物的情况下,果蝇可存活50小时左右,在不供给水的情况下,果蝇无法活过一天。蛹期果蝇在其正常5天生活周期下可取食其体重3~5倍之食物 ,雌果蝇在产卵期每日可取用与其体重等重之食物 。果蝇成虫的食物内需有醣类,而蛹期果蝇则可只依赖酵母即可生育。
以果蝇作为遗传学研究的材料,利用突变株研究基因和性状之间的关系已近一百年 ,至今,各种研究遗传学的工具已达完善的地步,果蝇提供我们对今日的遗传学的知识有其不可磨灭的贡献;从1980年初 ,Drs.C.Nesslein-Volhard和E.Weichaus以果蝇作为发育生物学的模式动物,利用其完备的遗传研究工具来探讨基因是如何调控动物体胚胎的发育,也带动了其它模式生物(线虫、斑马鱼、小鼠和拟南芥等)的研究 ,且成果非常多。
黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)是双翅目昆虫,生活史短,易饲养 ,繁殖快,染色体少,突变型多,个体小 ,是一种很好的遗传学实验材料,是一种模式生物 。基因组全长kb,大约编码13600个基因。
黑腹果蝇是一种原产于热带或亚热带的蝇种。它和人类一样分布于全世界 ,并且在人类的居室内过冬。雌性体长2.5毫米,雄性较之还要小 。雄性有深色后肢,可以此来与雌性作区别。
雌蝇可以一次产下400个0.5毫米大小的卵,它们有绒毛膜和一层卵黄膜包被。其发育速度受环境温度影响 。在25℃环境下 ,22小时后幼虫就会破壳而出,并且立刻觅食。因为母体会将它们放在腐烂的水果上或其他发酵的有机物上,所以它们的首要食物来源是使水果腐烂的微生物,如酵母和细菌 ,其次是含糖的水果。幼虫24小时后就会第一次蜕皮,并且不断生长,以到达第二幼体发育期 。经过三个幼虫发育阶段和四天的蛹期 ,在25℃下过一天,就会发育为成虫。
在20世纪生命科学发展的历史长河中,果蝇扮演了十分重要的角色,是十分活跃的模型生物。遗传学的研究 、发育的基因调控的研究、各类神经疾病的研究、帕金森氏病 、老年痴呆症、药物成瘾和酒精中毒、衰老与长寿、学习记忆与某些认知行为的研究等都有果蝇的“身影 ” 。
果蝇以发酵烂水果上的酵母为食 ,广泛分布于世界各温带地区。果蝇具有生活周期短 、容易饲养、繁殖力强、染色体数目少而易于观察等特点,因而是遗传学研究的最佳材料。早在1908年由天才的遗传学家摩尔根把它带上了遗传学研究的历史舞台,约在此后30年的时间中 ,果蝇成为经典遗传学的“主角” 。
科学家不仅用果蝇证实了孟德尔定律,而且发现了果蝇白眼突变的性连锁遗传,提出了基因在染色体上直线排列以及连锁交换定律。摩尔根1933年因此被授予诺贝尔奖。1946年 ,摩尔根的学生,被誉为“果蝇的突变大师”的米勒,证明X射线能使果蝇的突变率提高150倍 ,因而成为诺贝尔奖获得者。
在近代发育生物学研究领域中,果蝇的发生遗传学独领风骚 。1995年,诺贝尔奖再次授予三位在果蝇研究中辛勤耕耘的科学家。果蝇为进一步阐明基因-神经(脑)-行为之间关系的研究提供了理想的动物模型。
专家认为 ,近一个世纪以来,果蝇遗传学在各个层次的研究中积累了十分丰富的资料 。人们对它的遗传背景有着比其他生物更全面更深入的了解。作为经典的模式生物,果蝇在21世纪的遗传学研究中将发挥更加巨大而不可替代的作用。 大肠埃希氏菌(E.coli)通常称为大肠杆菌,是人类和大多数温血动物肠道中的正常茵群 。但也有某些血清型的大肠杆菌可引起不同症状的腹泻 ,根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类:致病性大肠杆菌(EPEC) 、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(E.IIEC) 、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
大肠杆菌电子显微镜下图像
大肠杆菌0157:H7血清型属肠出血性大肠杆菌,自1982年在美国首先发现以来,包括我国等许多国家都有报道 ,且日见增加。日本自80年代以来因食物污染该菌导致的数起大暴发,格外引人注目 。在美国和加拿大通常分离的肠道致病菌中,截止2013年它已排在第二和第三位。大肠杆菌0157:H7引起肠出血性腹泻 ,约2%~7%的病人会发展成溶血性尿毒综合症,儿童与老人最容易出现后一种情况。致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发流行,病情严重者 ,可危急生命 。
大肠杆菌(Escherichiacoli,E.coli)革兰氏阴性短杆菌,大小0.5×1~3微米。周身鞭毛 ,能运动,无芽孢。能发酵多种糖类产酸 、产气,是人和动物肠道中的正常栖居菌,婴儿出生后即随哺乳进入肠道 ,与人终身相伴,其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长,减少蛋白质分解产物对人体的危害 ,还能合成维生素B和K,以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病 。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖,几占粪便干重的1/3。兼性厌氧菌 。在环境卫生不良的情况下 ,常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌,可认为是被粪便污染的指标,从而可能有肠道病原菌的存在。因此 ,大肠菌群数(或大肠菌值)常作为饮水和食物(或药物)的卫生学标准 。大肠杆菌的抗原成分复杂,可分为菌体抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原(K),后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。根据菌体抗原的不同 ,可将大肠杆菌分为150多型,其中有16个血清型为致病性大肠杆菌,常引起流行性婴儿腹泄和成人肋膜炎。大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料,如局限性转导就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的 。莱德伯格(Lederberg)采用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行实验 ,奠定了研究细菌接合方法学上的基础,以及基因工程的研究。
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌,主要寄生在大肠内。它侵入人体一些部位时 ,可引起感染,如腹膜炎 、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等 。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的,尤其是对孩子及老人。
大肠细菌(E.coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病 ,为人和动物肠道中的常居菌,在一定条件下可引起肠道外感染 。某些血清型菌株的致病性强,引起腹泻 ,统称病致病大肠杆菌。
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强,55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。在自然界的水中可存活数周至数月,在温度较低的粪便中存活更久 。胆盐 、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感 ,但易耐药,是由带有R因子的质粒转移而获得的。 斑马鱼属鲤科短担尼鱼属,原产于南亚,是一种常见的热带鱼 。斑马鱼体型纤细 ,成体长3-4cm,对水质要求不高。孵出后约3个月达到性成熟,成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精 ,体外发育,胚胎发育同步且速度快,胚体透明 。发育温度要求在25-31℃之间。斑马鱼由于个体小 ,养殖花费少,能大规模繁育,且具许多优点 ,吸引了众多研究者的注意。经过30多年的研究应用和系统发展,已有约20个斑马鱼品系,斑马鱼基因数据库里有相关的资料可供查询和下载 ,方便了研究 。斑马鱼的细胞标记技术 、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术 、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟,且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体,是研究胚胎发育分子机制的优良资源,有的还可做为人类疾病模型。斑马鱼已经成为最受重视的脊椎动物发育生物学模式之一 ,在其它学科上的利用也显示很大的潜力. 斑马鱼(Daniorerio,俗称zebrafish)具有繁殖能力强、体外受精和发育 、胚胎透明、性成熟周期短、个体小易养殖等诸多特点,特别是可以进行大规模的正向基因饱和突变与筛选。这些特点使其成为功能基因组时代生命科学研究中重要的模式脊椎动物之一。在国际上,斑马鱼模式生物的使用正逐渐拓展和深入到生命体的多种系统(例如 ,神经系统 、免疫系统、心血管系统、生殖系统等)的发育、功能和疾病(例如,神经退行性疾病 、遗传性心血管疾病、糖尿病等)的研究中,并已应用于小分子化合物的大规模新药筛选 。我国开展斑马鱼相关的研究无论在规模还是在重视程度上都远远落后于国际形势发展的需要。推动和发展斑马鱼模式生物在我国生命科学研究中的广泛使用是本中心的宗旨。在国家科技部重大科学研究计划的支持下 ,我们汇集优势,整合我国现有的斑马鱼主要研究力量,在未来几年内逐步建立全国共享的斑马鱼模式动物研究技术和资源库 ,向国内同行提供斑马鱼资源、信息和技术支撑 。本着提高服务效率和质量为原则,我们在上海和北京分别建立国家斑马鱼模式动物南方中心和北方中心。南方中心依托于中国科学院上海生命科学研究院,北方中心依托于北京大学和清华大学。两个中心本着优势互补的原则 ,共同开发研究技术和资源,以辐射状向国内研究人员提供服务,积极推进我国斑马鱼相关科学研究 。
斑马鱼的发育谱系
主要技术和资源服务内容:
1)斑马鱼基因表达分析服务:包括抽提斑马鱼基因组DNA和总RNA,核酸原位杂交探针制备和纯化 ,全胚胎原位杂交技术,显微注射技术,基因过表达(over-expression)和基因下调(morpholinoknockdown)技术;
2)斑马鱼转基因技术服务:包括各类斑马鱼非特异性和组织特异性启动子的克隆 ,基因组BAC文库筛选与修饰,基于Tol2转座子的转基因质粒的构建,以及子一代转基因系的筛选和保存;
3)斑马鱼基因功能活体检测服务:包括清醒斑马鱼在体共聚焦/双光子显微镜成像技术和在体电生理记录技术;
4)动物行为范式分析服务:包括感觉相关的应激行为 、视觉运动行为、学习记忆行为和药物成瘾行为等;
5)斑马鱼基因突变技术服务:包括插入诱变和ENU化学诱变技术;
6)斑马鱼转基因资源库和突变体资源库服务:包括研制、收集和分发各种斑马鱼转基因品系和突变体;
7)信息服务:包括建立斑马鱼资源信息网络数据库和提供斑马鱼基因组生物信息学分析服务。
转基因斑马鱼的制备主要采用两种方法:通过Tol2转座子构建组织特异性表达报告基因的方法;利用特定基因的启动子/增强子驱动报告基因在特定细胞组织中表达的方法。
首先构建以Tol2转座子为基础的enhancertrap载体 ,报告基因选用GFP或RFP,最小启动子来自斑马鱼gata2基因;将上述载体与体外转录得到的Tol2转座酶的mRNA共同注射到斑马鱼的单细胞受精卵中,受精卵长大后成为founder;Founder外交(out-cross)得到F1代胚胎 ,从中挑选出对于报告基因具有组织特异性表达模式的胚胎,拍照记录后分类培养;F1长大后通过linker-mediatedPCR的方法鉴定对应于GFP(或RFP)表达图式的Tol2插入位点,并通过与已知基因组数据比较,对插入位点进行定位与分析;通过外交纯化得到转基因鱼 ,直至得到只含有单个插入品系的转基因鱼 。通过克隆特定基因的启动子/增强子或BAC修饰法构建在特定组织器官或特定胚胎发育阶段表达报告基因的转基因品系。BAC方法如下:在斑马鱼基因组计划网站上通过BLAST将感兴趣的基因定位到已知的contig上,并通过contig信息寻找包含所选基因的BACID号;通过同源重组的方法对上述BAC克隆进行修饰,将报告基因引入原有的BAC克隆;将修饰过的BAC克隆通过显微注射的方法引入斑马鱼受精卵,连续观察并挑选具有特异表达模式的转基因鱼;将上述成鱼外交得到F1代 ,在F1代中筛选具有特异表达模式的成鱼,即得到所需的转基因品系。 在分类学上,小鼠属于哺乳纲(Mammalia) 、啮齿目(Rodentia)、鼠科(Muridae)、小鼠属(Mus)动物 。小鼠是由小家鼠演变而来。它广泛分布于世界各地 ,经长期人工饲养选择培育,已育成1000多近交系和独立的远交群。早在17世纪就有人用小鼠做实验,现已成为使用量最大 、研究最详尽的哺乳类实验动物。
1.小鼠属于脊椎动物门 ,哺乳纲小鼠啮齿目,鼠科,小鼠属动物 。
小鼠(清洁级)
2.成熟早 ,繁殖力强。小鼠6~7周龄时性成熟,雌性35~50日龄,雄性45~60日龄;体成熟雌性为65~75日龄 ,雄性为70~80日龄;性周期为4~5天,妊娠期为19~21天;哺乳期为20~22天;特别有产后发情(PostPartumOestrus)便于繁殖的特点,一次排卵10~23个(视品种而定),每胎产仔数为8~15头 ,一年产仔胎数6~10胎,属全年、多发情性动物,繁殖率很高 ,生育期为一年。
3.体形小,易于饲养管理 。小鼠是啮齿目实验动物中较小型的动物,一只小鼠出生时1.5克左右 ,哺乳一月后可达12~15克,哺乳、饲养1.5~2月即可达20克以上,可供实验需要 ,在短时间内可提供大量的实验动物。饲料消耗量少,一只成年小鼠的食料量为4~8克/天,饮水量4~7毫升/天 ,排粪量1.4~2.8克/天,排尿量1~3毫升/天,需要的饲养条件也较简单,因个体小 ,可节省饲养场地。
4.性情温顺,胆小怕惊 。小鼠经长期的培育,在用于实验研究时 ,性情温顺,易于抓捕,不会主动咬人 ,但在雌鼠哺乳期间或雄鼠打架时“捉弄 ”则会咬人,一般很少相互斗架,操作起来很方便 ,是理想的实验动物。小鼠在罐 、盒内饲养时,是很温顺的,但让其到罐外 ,很快就恢复到处乱窜的野性。雌鼠吃食仔鼠与其胆小怕惊有关 。
5.对外来刺激极为敏感。对于多种毒素和病原体具有易感性,反应极为灵敏,如百万分之一的破伤风毒素能使小鼠死亡,这是其他实验动物所不能比拟的。对致癌物质也很敏感 ,自发性肿瘤多 。
6.便于提供同胎和不同品系动物。可根据实验要求选择不同品系或同胎小鼠做实验,也可选择同一品种(或品系)、同年龄、同体重、同性别的小鼠做实验,由于动物遗传均一 ,个体差异小,实验结果精确可靠。
7.喜居于光线暗的安静环境,习于昼状夜动 ,喜欢啃咬。小鼠白天活动较少,夜间却十分活跃,互相追逐配种 ,忙于觅食饮水,为此夜间应备有饲料和饮水 。
8.体小娇嫩,不耐饥饿 ,不耐冷热,对环境的适应性差。对疾病的抵抗力也差,因而遇到传染病时往往会发生成群死亡。如果饲料中断和饮水中断会发生休克,恢复后对体质会带来严重损害 。特别怕热 ,一出汗就易得病死亡,如果饲料温度32℃时,常会造成小鼠死亡。
9.成雌鼠在动情周期不同级段 ,阴道粘膜可发生典型变化,根据阴道涂片的细胞学改变,可以推断卵巢功能的周期性变化。成年雌鼠交配后10~12小时阴道口有白色的阴道栓 ,这是受孕的标志,小鼠较为明显 、大鼠和豚鼠不明显 。小鼠的动情期往往开始于晚间,最普遍的是在晚10点到晨1点 ,偶尔在早晨1~7点,很少在白天,大鼠也类似 ,但较小鼠稍早,一般在下午4~10点。
10.小鼠面部尖突,嘴脸前部有长长的触须,耳耸立呈半圆形 ,眼大鲜红,生有较长的尾,尾部有模列并覆有环状角质的小表皮鳞 ,其数量小于200片。
11.小鼠发育成熟时体长小于15.5cm,体重雌性为18~40克,雄性为20~49克 ,双子宫型,胸部有3对乳头,鼠蹊部有2对乳头 ,有胆囊,胃容量小,肠内能合成维生素C ,小鼠的染色体为20对,寿命2~3年 。
12.小鼠的体温38(37~39)℃,呼吸频率163(84~230)次/分,心跳频率625(470~780)次/分 ,耗氧量1530mm2/g活体重,通气量24(11~36)ml/分,潮气量0.15(0.09~0.23)ml ,收缩压113(95~125)mmHg、舒张压81(67~90)mmHg,红细胞总数9.3(7.7~12.5)百万/mm3,血红蛋白14.8(10~19)g/100ml ,白细胞总数8.0(6~12)千/mm3,总蛋白4.8(4.2~5.5)g%。
13.小鼠有多种手色,不能都叫小白鼠 ,一般通称为小鼠。小鼠手色有白色(albino),鼠灰色(ayouti)、黑色(black) 、棕色(brown)、**(yellow)、巧克力色(chocolate) 、肉桂色(cinnamon)、淡色(dilution)、白斑(piebeld)等 。 英语名称:yeast
酵母菌是一些单细胞真菌,并非系统演化分类的单元。截止2012年为止已知有1000多种酵母 ,根据酵母菌产生孢子(子囊孢子和担孢子)的能力,可将酵母分成三类:形成孢子的株系属于子囊菌和担子菌。不形成孢子但主要通过芽殖来繁殖的称为不完全真菌,或者叫“假酵母”。截止2012年为止已知大部分酵母被分类到子囊菌门 。酵母菌主要的生长环境是潮湿或液态环境,有些酵母菌也会生存在生物体内。
酿酒酵母的扫描电镜照片
酵母营专性或兼性好氧生活 ,如今未知专性厌氧的酵母。在缺乏氧气时,发酵型的酵母通过将糖类转化成为二氧化碳和乙醇来获取能量 。
C6H12O6(葡萄糖)→2C2H5OH(酒精)+2CO2↑
在酿酒过程中,乙醇被保留下来;在烤面包或蒸馒头的过程中 ,二氧化碳将面团发起,而酒精则挥发。
多数酵母可以分离于富含糖类的环境中,比如一些水果(葡萄 、苹果、桃等)或者植物分泌物(如仙人掌的汁)。一些酵母在昆虫体内生活 。酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形 、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多 ,一般为1~5微米′5~30微米 。酵母菌无鞭毛,不能游动。 酵母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜 、细胞核、细胞质、液泡 、线粒体等,有的还具有微体。酵母菌的细胞形态酵母菌的细胞形态酵母菌细胞结构的显微照片酵母菌的菌落 。
大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似 ,但比细菌菌落大而厚,菌落表面光滑、湿润、粘稠,容易挑起 ,菌落质地均匀,正反面和边缘 、中央部位的颜色都很均一,菌落多为乳白色,少数为红色 ,个别为黑色。 啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。 拉丁名(Arabidopsisthaliana)十字花科。二年生草本,高7~40厘米 。基生叶有柄呈莲座状,叶片倒卵形或匙形;茎生叶无柄 ,披针形或线形。总状花序顶生,花瓣4片,白色 ,匙形。长角果线形,长1~1.5厘米 。花期3~5月。我国内蒙、新疆、陕西 、甘肃、西藏、山东 、江苏、安徽、湖北、四川 、云南等省区均有发现。拟南芥的优点是植株小(1个茶杯可种植好几棵)、每代时间短(从发芽到开花不超过6周)、结子多(每棵植物可产很多粒种子) 、生活力强(用普通培养基就可作人工培养) 。
拟南芥反向演化
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